摘要：为寻求防治晚年性痴呆的有用法子，操纵Morris水迷宫评议了中药补肾益智方(由蛇床子、枸杞子、女贞子、人参等构成)对由D_半乳糖致亚急性衰老加上Meynert核损毁所致阿尔茨海默病模子大鼠的研习回顾本领的维护效用。结果证实：补肾益智方也许刷新模子大鼠的研习回顾成就，征求缩短模子大鼠正在Morris水迷宫中寻找到平台的遁避湮没期(P＜0.01)，延迟其正在原平台象限拍浮的隔断(P＜0.05)。提示补肾益智方对阿尔茨海默病模子大鼠的研习回顾本领有必然的维护效用。
晚年性痴呆(又称阿尔茨海默病，Alzheimers disease,AD)已成为告急危机晚年人壮健和影响其生涯质料的重要疾病之一，但目前仍缺乏有用的防治药物和设施。为此，咱们操纵 Morris 水迷宫评议了自制的补肾益智方对由 D_ 半乳糖致亚急性衰老加上鹅膏蕈氨酸(Ibotenic acid,IBO)损毁脑 Meynert 基底核所致的 AD 大鼠模子的研习回顾本领的维护效用。
补肾益智方由蛇床子、枸杞子、女贞子、人参等中药构成，制成浓缩液。双益平片购自上海红旗制药厂(批号为 970101)，每片含石杉碱甲(Huperzine_A)0.05mg。D_ 半乳糖为上海试剂二厂生产，IBO 购自 Sigma 公司，均为认识纯。
15 月龄初晚年雌性 Wistar 大鼠 48 只，体重 300～450 g，均由第一军医大学实践动物核心供给。惯例分笼豢养，自然照明，疏忽饮水和取食。随机分成 4 组，每组 12 只：此中初晚年平常对比组(简称平常组)，腹腔打针心理盐水 6 周及脑内 Meynert 核打针心理盐水；AD 模子组(简称模子组)，腹腔打针 D_ 半乳糖(48 mg.kg-1.d-1)6 周和脑内双侧 Meynert 核打针 IBO；双益平片阅览组(简称双益平组)和补肾益智方阅览组(简称补肾方组)，制模均同模子组，但正在腹腔打针半乳糖(6 周)同时永别赐与双益平片(0.3 mg.kg-1.d-1)或补肾益智方浓缩液(相当生药量 6 g.kg-1.d-1)灌胃。脑内打针正在腹腔打针后参考相合文献举行［1］。制模解散后，平常组、模子组、双益平片组和补肾方组永别存活 9 只、8 只、7 只和 9 只。
全数大鼠正在脑内打针后举行 Morris 水迷宫测试。Morris 水迷宫(Morris water maze,MWM)参照相合文献创制［2］。为一不锈钢的圆形水池，直径 200 cm，高 50 cm，水深 30 cm，水温限制正在(26±1)℃。池壁标明 4 个入水点，由此将水池均分为 4 个象限，任选此中 1 个象限，正中就寝 1 个直径 11 cm、高 29 cm 的平台。迷宫上方安有摄像机，并和录像机以及显示器结合，自愿录入大鼠拍浮轨迹举行认识。测试次序征求：(1)定位航行试验(place navigation)：历时 5 d，每天上下昼各 4 次，将大鼠面向池壁永别从 4 个入水点放入水中，记载其正在 2 min 内寻找到平台的时辰(遁避湮没期，escape latency)。要是大鼠正在 2 min 未找到平台，则由实践者用手牵引其至平台上，让大鼠逗留 10 s，再放回笼中。(2)空间研究试验(spatial probe)：第 6 天取消平台，将大鼠任选 1 个入水点放入水中，记载其 2 min 的拍浮轨迹，永别推算其超过各象限内的拍浮隔断以及正在原平台象限拍浮的时辰和隔断占扫数拍浮时辰和隔断的百分比。
采用 SAS6.12 统计软件包认识。此中独身分方差认识，按照方差齐性考验结果，永别采用 Newman_Keuls 法或 Scheffe 法。众身分反复丈量方差认识采用 Huynh_feldt 法。明显性程度取 α=0.05。
图 1 是各组大鼠正在历时 5 d 40 次定位航行试验中日均匀遁避湮没期的转折。从中能够看到，4 组大鼠均跟着熬炼天数添补，遁避湮没期越来越短，证实各组大鼠正在历次研习熬炼中均已慢慢研习寻找平台。但研习回顾流程存有鲜明差别。经以测得的大鼠每次遁避湮没期行动阅览值，以组别、测试天数行动效应因子(effective factor)对各组大鼠的总体遁避湮没期转折举行众身分反复丈量统计认识［3］，结果证实各组间遁避湮没期 5 d 的总体转折具有明显性差别(P＜0.01)。两两斗劲发明：模子组的遁避湮没期较平常组鲜明延迟，差别有明显性(P＜0.001)。补肾益智方组永别与模子组、双益平组斗劲，其遁避湮没期明显缩短(均 P＜0.001)，但同时其遁避湮没期仍较平常组明显延迟(P＜0.001)。双益平组与模子组斗劲，差别则无明显性(P＞0.05)，与平常组斗劲有明显性差别(P＜0.001)。
表 1 为各组大鼠取消平台后 2 min 正在各象限拍浮的隔断(R、P、L、O 永别代表大鼠正在原平台右侧象限、原平台象限、原平台左侧象限和原平台对侧象限)。经独身分方差认识，平常组大鼠各象限拍浮隔断的差别有明显性(P＜0.001)，补肾方组大鼠各象限拍浮隔断之间的差别亦有明显旨趣(P＜0.05)，而模子组、双益平组大鼠各象限拍浮隔断差别无明显性(P＞0.05)。证实平常组和补肾方组大鼠对原平台象限的回顾较模子组和双益平组好。
同时咱们检测了各组大鼠正在原平台象限(P)拍浮的时辰(tP)和隔断(lP)与总拍浮时辰(tT)和总隔断(lT)之比p1(tP/tT)和p2(lP/lT)。经独身分方差认识，上述 4 组之间的时辰比和隔断比斗劲，差别均有高度明显性(P＜0.01)。两两斗劲结果显示：模子组、双益平组原平台象限拍浮的时辰比和隔断比永别与平常组斗劲，差别均有明显性(均 P＜0.01)，二者之间斗劲无明显性差别(均 P＞0.05)。补肾方组原平台象限拍浮的时辰比和隔断比永别与模子组和双益平组斗劲，差别不明显(均 P＞0.05)，但有添补的趋向。
缺乏有用的防治设施是此刻 AD 探求中亟待治理的重要题目之一。目前正在临床上仍然行使的 AD 息养药物重要征求胆碱酯酶箝制剂、钙阻滞剂和神经养分剂等，但疗效均不行令人称心。如美国 FDA(Food and Drug Administration)已准许临床用于息养 AD 的 Tacrine(他克林)、Aricept(安理申)均仅能刷新个人认知冲击的症状，且肝脏毒性等副效用较大［4，5］。阐述中医特质，寻求息养 AD 的有用中药有特别厉重的旨趣。国表里已有很众学者就此举行了探求，初阶结果提示补肾、调心等方药对实践性 AD 模子鼠研习回顾本领有必然的刷新效用［6～8］。但正在既往的探求中时时存正在模子不甚理思、研习回顾动作评议不足科学客观以及统计认识设施不妥等题目。补肾益智谋略对 AD 肾精亏折、气血亏虚的病机安排组方，全方具补肾填精、益气养血、开窍醒神之效力，临床试用于痴呆已显示了初阶的疗效。为进一步真切补肾益智方对 AD 研习回顾的效用，本探求正在 AD 动物模子、研习回顾检测以及统计学认识等方面作了较大的改善。正在总结以前 AD 动物模子探求成就的根底上，安排了 D_ 半乳糖致亚急性衰老团结 Meynert 核损毁的众身分复合实践性 AD 大鼠模子，即正在国表里认同和普及行使的 D_ 半乳糖致亚急性衰老模子供给一个老化靠山的根底上，再以 IBO 损毁 Meynert 核模仿 AD 的胆碱能神经功用缺失。咱们的前期探求就业已证实，此模子大鼠显示为空间研习回顾本领明显低落，大脑皮质普及区域 AChE 阳性神经纤维密度均较平常对比组明显减低，提示该复合模子较以前的独身分 AD 动物模子更亲切 AD 庞大的临床病理转折流程［1，9］。同时，咱们还以为，因为中药效用的众症结性，复合的 AD 模子能够更适适用作筛选防治 AD 有用中药的探求。此外，咱们选用了近年开展较速、也许较好地评议实践动物空间研习回顾本领的 Morris 水迷宫测试体系，操纵了征求众身分反复丈量数据正在内的统计认识设施，抬高了探求结果的客观性和科学性。
上述探求结果提示，D_ 半乳糖加快衰老加上 Meynert 核损毁的 AD 模子组大鼠正在 Morris 水迷宫中均匀遁避湮没期鲜明延迟、原平台象限拍浮的时辰和隔断明显缩短，证实模子组大鼠研习回顾本领告急受损。而补肾方组大鼠遁避湮没期较模子组和对比组缩短，以及原平台象限拍浮的隔断和时辰延迟。提示补肾益智方对本实践 AD 模子鼠的研习回顾本领有优于对比药的维护效用。另一方面，补肾方组大鼠与平常组正在 Morris 水迷宫测试中存正在的差别，仿佛提示补肾益智方尚无法齐备维护 D_ 半乳糖和 IBO 所致的大鼠空间研习回顾损害，这能够与模子组神经元损毁的水准较重、神经元修复本领 的极限以及补肾益智方效用的强度、给药剂量和效用机制相合。本探求显示了补肾益智方对 D_ 半乳糖和 IBO 所致 AD 模子大鼠空间研习认知损害的初阶维护效用，对其效用的神经生物学根底尚有赖于以来进一步探求和斟酌。
［1］胡镜清，赖世隆，王奇，等.补肾益智方对阿尔茨海默病大鼠模子脑内胆碱能神经体系的维护效用［J］.广州中医药大学学报，1999，16(3)：201
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［9］胡镜清，赖世隆，王奇，等.D_半乳糖加快衰老团结Meynert核损毁大鼠研习回顾本领转折的初阶阅览［J］.中华晚年医学杂志，2000，19(2)：5
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