中药方剂对切割海马伞大鼠学习、记忆的保护作用


宗旨:切磋以党参、黄芪、何首乌、山萸肉等益肾健脑、益气养血为主方的中医药对切割海马伞大鼠研习、影象力的影响以及对隔区胆碱能神经元的爱戴用意。技巧:实践组和比照组动物切割海马伞前后分手用中药煎剂和自来水灌胃,术后第3、4周行避暗回避试验和跳台试验,结果灌注固定动物,取隔区切片作ChAT免疫组化和NOS组化染色,显微镜下记数切割海马伞侧内侧隔核和斜角带笔直支ChAT和NOS阳性神经元数,并窥察胞体和纤维转变。结果:避暗回避试验的找寻次数、滞留期间及跳台试验的主动和总回避反映阳性率实践组均好于比照组(P<0.01或0.05),切割海马伞侧隔区ChAT和NOS阳性神经元数均较比照组众(P均<0.01),其胞体和纤维萎缩水准也较比照组轻。结论:以党参、黄芪、何首乌、山萸肉等为主方的中医药对切割海马伞大鼠的研习、影象及隔区的胆碱能神经元具有爱戴用意。

晚年性痴呆症(Alzheimers disease, AD)的紧要病理浮现之一是基底前脑胆碱能神经元的退行性变,其水准与AD精神病理蜕化、影象损害和认知蹂躏水准相干。 西医诊疗AD重要以降低中枢神经体系乙酰胆碱(ACh)水准为主

,而根蒂切磋显睹报道。本切磋按照中医诊疗AD的表面,拣选益肾健脑,益气养血为主的中药配方制成煎剂,正在切割海马伞前后予以灌胃,对照窥察此中医方子剂对切割海马伞大鼠研习、影象力的影响以及对基底前脑隔区胆碱能神经元的爱戴用意。

1.1中药煎剂、动物分组及灌胃以党参、黄芪、何首乌、山萸肉等益肾健脑、益气养血的10味中药,加水800ml浸泡4h,电炉烧开后间断熬制30min,然后6层纱布过滤获得约300ml中药煎剂,冷却后置冰箱冷藏备用。220~250克成年SD大鼠18只(本院实践动物中央供给),随机分成实践组和比照组各9只,两组动物分手用中药煎剂和自来水2ml灌胃14天后,行海马伞切割术,术后一连灌胃28天。

1.4样子学检测活动测试完毕,动物麻醉后经升主动脉灌注100ml心理盐水和400ml 4%众聚甲醛0.1 mol/L PB(pH7.4),正在定位仪上取前囟前后4mm一段脑,后固定4h入20%蔗糖0.1 mol/L PB(PH7.4)中4℃住宿,越日机闭块下重后行冰冻连气儿切片,厚40μm,搜集从胼胝体交叉处至前连接之间的切片,共4套,第1套作Nissl染色,第2套用ABC法作胆碱乙酰迁移酶(choline acetyltransferase, ChAT)免疫组化染色

。显微镜下计数切割海马伞侧隔区内侧隔核和斜角带笔直支中ChAT和 NOS阳性神经元数,并窥察神经元胞体和纤维转变情景。

2.1活动学测试灌胃前两组动物避暗回避试验的找寻次数和滞留期间t磨练,P均>0.05,证明两组动物活动无明显性分歧。切割海马伞术后第3周避暗回避试验的找寻次数,实践组3.11±0.78次,比照组4.77±1.09次,两组斗劲分歧明显(t=3.12,P<0.01);滞留期间实践组376.2±78.3秒,比照组则为288.4±74.9秒,证据两组也有明显性分歧(t=2.43,P<0.05)。第4周跳台试验实践组主动回避反映阳性率分手为(36.7±8.7)%和(12.2±4.4)%,两组间斗劲分歧有极明显性(χ

=14.56,P<0.01)。两组总回避反映阳性率别为(74.4±8.8)%和(52.2±13.0)%,两组间分歧明显(χ

2.2样子学检测ChAT免疫组化切片睹实践组切割海马伞侧内侧隔核和斜角带笔直支中ChAT阳性神经元数目与平常侧比拟稍有删除,约为平常侧的70%~80%,部门神经元胞体略显萎缩,突起稍短(图1)。而比照组切割海马伞侧内侧隔核和斜角带笔直支中的ChAT阳性神经元数目与平常侧比拟删除较明白,约为平常侧的50%~60%,胞体萎缩较明白,突起也较短(图2)。NOS组化切片实践组和比照组显示的NOS阳性神经元与ChAT免疫组化切片中所睹ChAT阳性神经元彷佛,只是平常侧和切割海马伞侧的NOS阳性神经元数目均略少于ChAT阳性神经元的数目(图3、4)。实践组和比照组动物切割海马伞侧隔区ChAT阳性神经元数分手为368.8±38.5和296.7±34.5,两组斗劲分歧有极明显性(t=4.18,P<0.01)。实践组和比照组NOS阳性神经元数分手为296.7±34.5和263.8±4.15,两组斗劲分歧有极明显性(t=4.81,P<0.01)。

。本切磋选用党参、黄芪、何首乌、山萸肉等益肾健脑、益气养血为主的中方子剂,正在切割海马伞前14天即发端灌胃,可使得隔区胆碱能神经元正在轴突毁伤、间断从靶机闭获得神经养分因子时即已取得了爱戴。因神经元一朝受损变性则很难还原,这也可诱导往后用中药防卫AD的发作。切割海马伞后一连用中药灌胃,可撑持药物对隔区胆碱能神经元的爱戴用意,并使之更为良久。结果证据,实践组动物的活动学测试结果与比照组比拟,避暗回避试验的找寻次数删除,滞留期间延伸,跳台试验的主动及总回避反映阳性率也较比照组扩充,证明中药灌胃的实践组动物研习、影象本领较比照组还原好。ChAT是胆碱能神经元特异性标记物,而正在隔区NOS则与ChAT部门共存

,隔区NOS神经元的转变可响应胆碱能神经元的转变,NOS组化染色显示的神经元胞体轮廓显露、突起仔细,故咱们选用ChAT免疫组化和NOS组化技巧检测隔区胆碱能神经元的样子学转变。结果证据,实践组切割海马伞侧隔区ChAT和NOS阳性神经元数目明白众于比照组,并且胞体和突起的萎缩水准也较比照组为轻,证明所选中方子剂对隔区胆碱能神经元确有必然的爱戴用意。

正在诊疗AD中方子剂的根蒂切磋中,有报道芍药当归散对晚年性痴呆鼠空间研习、影象和海马突触布局有明白的影响

。亦有报道,补肾中药可扩充拟痴呆小鼠胆碱能M受体连合容量值、消重胆碱酯酶活性,从而抵达降低影象的成果

。本切磋所用中方子剂降低实践组动物的研习、影象本领及对隔区胆碱能神经元的爱戴用意,其机制尚不真切,除了上述或者的机制除外,是否还与所选用的中药具有类神经养分因子用意或是通过激活胆碱能神经元皮相的神经成长因子受体(NGF—R),使其对界限处境中低浓度NGF、BDNF的敏锐性扩充,从而爱戴了胆碱能神经元,或(和)少少欠亨过海马伞如走正在胼胝体上方的隔皮质束的隔区胆碱能投射纤维,与海马神经元突触布局发作转变起到代偿用意所致,尚待进一步切磋。

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