鸡胚口服液免疫调节作用的实验研究


用毁坏机将鸡胚捣碎,超声破裂细胞,超滤取得淡黄色透后液体,其众肽含量3 mg/ml。用该超滤液给小鼠灌胃30 d。测血中的溶血素活性,并举办淋巴细胞转化试验和巨噬细胞吞噬试验。

鸡胚口服液可煽动小鼠淋巴细胞的增殖,普及溶血素活性,使小鼠巨噬细胞对绵羊红细胞的吞噬百分数和吞噬指数均明显普及。

挑选孵育15 d、发育寻常的鸡胚,从壳中取出后冲洗整洁,用构制匀浆机捣碎成糊状,用蒸馏水妥贴稀释后用超声毁坏仪破裂细胞,以开释细胞内因素。然后,用拘押分子量10 000 D的中空纤维超滤柱超滤,超滤液中列入甜菊糖甙作调味剂,用蒸馏水调节众肽含量至3.0 mg/ml,过0.2 μm微孔滤膜除菌后分装,密封于棕色口服液瓶中备用。

将小鼠随机分为4组,每组10只。比较组予以心理盐水0.2 ml/10g;鸡胚口服液低、中、高剂量组分辩予以含众肽0.025%、0.075%和0.25%的鸡胚口服液0.2 ml/10g(折合众肽量分辩为5、15及50 mg/kg),各组动物均持续灌胃30 d。

2.2.1脾细胞悬液的制备无菌前提下取脾,置于盛有无菌Hanks液的小平皿中撕碎,轻轻研磨制成单细胞悬液,过200目筛,用无菌Hanks液洗3次,每次离心10 min (1 000 r/min)。将细胞悬浮于2 ml作育液中,用台盼兰染色检讨细胞成活景况,抉择成活细胞正在95%以上者举办试验。调节细胞浓度为2×10

2.2.2淋巴细胞增殖反响将细胞悬液分两孔加至24孔作育板中,每孔1 ml,一孔加ConA液50 μl(相当于5 mg/ml),另一孔动作比较,置5%CO

,37℃前提下作育72 h。作育完结前4 h,每孔吸去上清液0.7 ml,列入不含小牛血清的RPMI 1640作育液,同时列入MTT 50 μl/孔(5 mg/ml),不停作育4 h。作育完结后,每孔列入1 ml酸性异丙醇,奏乐平均,使紫色结晶全部熔化,然后分装到96孔作育板中,每个孔分装3孔动作平行样,用酶联免疫检测仪,正在波长570 nm处测定招揽度。

末次给药30 min后,颈椎脱臼正法小鼠,经腹腔注入心理盐水2 ml,吸出腹腔洗液1 ml,滴于载玻片上,Giemsa-磷酸缓冲液染色。油镜下计数巨噬细胞数,并按下式估量吞噬百分率和吞噬指数,结果睹表3。

本讨论行使今世超声和超滤手艺,将鸡胚中的小分子众肽因素提取出来,用无菌手艺制备鸡胚口服液。讨论注解,用此法制备的鸡胚口服液,能煽动小鼠的淋巴细胞转化,普及血清中的溶血素程度,加强巨噬细胞吞噬功用。提示该制剂可加强机体的细胞免疫和体液免疫功用。

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2022-03-24 09:59:59